بیان، خالص‏سازی و بررسی فعالیت آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی sap۲ کاندیدا آلبیکنس در سیستم مخمری پیکیا پاستوریس

Authors

elahe mahmoudi

ph.d. student, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran hamid reza kalhor

assistant professor, department of biochemistry, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran mohammad hossein yadegari

assistant professor, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran majid sadeghizadeh

professor, department of genetics, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran zohair mohammad hassan

abstract

هدف: آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی (sap2) کاندیدا آلبیکنس نقش محوری در اتصال، تهاجم و بیماری‏زایی این مخمر فرصت‏طلب دارد. هدف از این مطالعه کلون نمودن، بیان و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم sap2 است. همچنین در این تحقیق برای اولین بار، از سیستم یوکاریوتی پیکیا پاستوریس برای بیان پروتئین نوترکیب sap2 استفاده شد. مواد و روش‏ها: ژن sap2 کاندیدا آلبیکنس با انتهاهای چسبان ecor1 و sacii توسط pcr تکثیر و درون ناقل t/a ساب‏کلون شد. با استفاده از آغازگرهای عمومی توالی این ژن تعیین شد و سپس درون ناقل بیانی pgapzαa قرار گرفت. سازه نوترکیب به درون مخمر پیکیا پاستوریس انتقال داده شد. ژن sap2 طی پدیده نوترکیبی همولوگ درون ژنوم مخمری پیکیا پاستوریس داخل شد. پروتئین بیان شده به کمک روش وسترن بلاتینگ و با استفاده از آنتی‏بادی مونوکلونال بر علیه پروتئین sap2 تأیید شد. در نهایت پروتئین به‏دست آمده با کمک ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی ni-nta تخلیص و فعال بودن آنزیم تأیید شد. نتایج: در این تحقیق تکثیر ژن sap2 کاندیدا آلبیکنس و وارد نمودن آن درون ژنوم مخمر بیانی پیکیا پاستوریس با روش نوترکیبی همولوگ انجام شد. علاوه بر این، کلونی از مخمر را به‏دست آمد که پروتئین نوترکیب sap2 را به محیط ترشح می‏کرد. بالاترین بیان پس از طی زمان 96 ساعت در دمای 30 درجه سانتی‏گراد به‏دست آمد. نتیجه‏گیری: القای ژن sap2 در مخمر پیکیا پاستوریس منجر به افزایش قدرت بیان انبوه این ژن نسبت به سیستم بیانی باکتریایی می‏شود. همچنین نیاز به تغییرات بعد از ترجمه و فعال نمودن آنزیم، به علت استفاده از سیستم بیانی یوکاریوتی، از بین می‏رود. برطبق یافته‏های تحقیق حاضر، آسپارتیل اسید پروتئیناز تخلیص شده در این تحقیق خود فعال بوده و قادر به تجزیه bsa به‏عنوان یک سوبسترا است. این پروتئین نوترکیب در ph اسیدی بیشترین فعالیت را دارد.

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

کلونینگ، بیان و جداسازی آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی sap2 کاندیدا آلبیکنس در پیکیا پاستوریس

آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحیsap2 کاندیدا آلبیکنس نقش محوری در اتصال، تهاجم و سیستمیک شدن این مخمر فرصت طلب دارد. هدف از این مطالعه کلونینگ، بیان و خالص سازی آنزیم sap2 کاندیدا آلبیکنس در مخمر متیلوتروفیک پیکیا پاستوریس بود. پس از آن اثر آنزیم فعال نوترکیب بر فعالیت ماکروفاژهای موش balb/c در بلع بلاستوکنیدیهای کاندیدا آلبیکنس و همچنین آزاد سازی no بررسی شد. در این تحقیق، پس از تکثیر ژنsap2 ...

تاثیرعصاره های آبی و اتانولی برگ و ساقه گیاه چویل بر مهار آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی کاندیدا آلبیکانس

مقدمه: چویل گیاهی دارویی از خانواده چتریان است و از زمانهای قدیم در پزشکی کاربرد وسیعی داشته است. مطالعه حاضر به منظور ارزیابی تأثیر مهاری عصارههای آبی و اتانولی برگ و ساقه گیاه چویل بر آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی کاندیدا آلبیکانس انجام شد. روش کار: در این مطالعه مقطعی، 19 جدایه کاندیدا آلبیکانس از بیماران دچار ضعف سیستم ایمنی در یاسوج جدا و شناسایی گردید. تأثیر ضدکاندیدیایی عصارههای آبی...

full text

بیان ترشحی ژن بتا-گزایلوزیداز باکتریایی حاوی برچسب‌ هیستیدین در پیکیا پاستوریس

سابقه و هدف: بتا-گزایلوزیدازها (EC 3.2.1.37)، از مهم‌ترین آنزیم‌ها در مجموعه آنزیم‌های همی‌سلولازی با پتانسیل کاربرد بالا در صنعت از جمله تولید بیواتانول، از خانواده گلیکوزیدازها بوده که حذف متوالی بقایای بتا-گزایلوزیل را از انتهای غیر احیا‌کننده‌ی گزایلوبیوز و گزایلوالیگوساکاریدهای خطی با پیوندهای β-1,4 انجام داده و به همراه بتا-گزایلانازها، برای دپلیمریزه کردن کامل گزایلان ضروری می‌با...

full text

کلونینگ و بیان ترشحی ژن لیپاز (btl۲) باسیلوس ترموکاتنولاتوس در پیکیا پاستوریس با استفاده از توالیهای نشانه طبیعی و آلفا فاکتور مخمری

لیپاز (triacylglycerol acylhydrolase ec 3.1.1.3 )، هیدرولیز تری آسیل گلیسرول به گلیسرول و اسیدهای چرب را در حد فاصل لایه چربی و آب کاتالیز می کند. لیپازها در فرمولاسیون شوینده ها، تهیه بیوسورفکتانتها، صنایع روغن، غذایی، کشاورزی، چوب و کاغذ، پزشکی و دارویی کاربرد دارند. مهم ترین کاربرد این آنزیم در صنایع شوینده است. در این تحقیق، پس از استخراج dna ژنومی باکتری باسیلوس ترموکاتنولاتوس ) bacillus t...

full text

بررسی بیان توالی کامل ژن گلیکوپروتئین سطحی 2 ویروس هپاتیت C در مخمر پیکیا پاستوریس

سابقه و هدف: عفونت ویروس هپاتیت C با اتصال پروتئینE2 ویروس به گیرنده سطح سلول کبد انسان آغاز می شود. بنابراین به عنوان یکی از اهداف تحقیقات دارو و واکسن بر علیه این عفونت مطرح می باشد. این مطالعه برای اولین بار در ایران با هدف انتقال تمام طول ژن HCV-2a (JFH1) E2 توسط وکتور نوترکیب E2-pPICZAa به مخمر پیکیاپاستوریس سویه KM71H و بیان ژن یاد شده در این سیستم بیانی انجام شد. <stro...

full text

بررسی بیان توالی کامل ژن گلیکوپروتئین سطحی 2 ویروس هپاتیت C در مخمر پیکیا پاستوریس

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}

Journal title:

پژوهش های آسیب شناسی زیستی

جلد ۱۲، شماره ۴، صفحات ۷۱-۸۳

Keywords

پیکیا پاستوریس کاندیدا آلبیکنس کلونینگ sap2

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com